从细胞中提取蛋白质的问题.用 含GSTtag 的DNA去tansfect 细胞,然后用 West blot 检查蛋白表达 然后用 GST pulldown 去获得 表达的蛋白和与之反应的蛋白,跑胶）,然后把band 切下来,用质谱仪检查.我看程序中并没有加 脱氧核糖核酸酶 去除杂质的步骤,只是用很高的速度去 spin cell lysate,然后取上清液.这样可以吗?脱氧核糖核酸等杂质会不会对结果产生影响啊?还是说它们根本进不到胶里面?
问题描述：
从细胞中提取蛋白质的问题.
用 含GSTtag 的DNA去tansfect 细胞,然后用 West blot 检查蛋白表达 然后用 GST pulldown 去获得 表达的蛋白和与之反应的蛋白,跑胶）,然后把band 切下来,用质谱仪检查.我看程序中并没有加 脱氧核糖核酸酶 去除杂质的步骤,只是用很高的速度去 spin cell lysate,然后取上清液.这样可以吗?脱氧核糖核酸等杂质会不会对结果产生影响啊?还是说它们根本进不到胶里面?
答
带GST tag的蛋白体外分离纯化时,GST pulldown过程中,只有带GST的融合蛋白可以特异结合到柱子上,核酸等杂质都随流出液流走了,不会干扰你的实验结果.