谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用?
问题描述：
谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用?
答
用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合.一般每加温一度,读一次信号.当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多.曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧光信号的变化!开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的,接近Tm时,突然变化加大,所以出现峰值.再升温,产物全部解离,就又是一条直线了.
如果有非特异性产物,在加热过程中就会出现一些比较矮,宽的峰.