PCR扩增退火温度确定
问题描述：
PCR扩增退火温度确定
引物F:SIZE:20 TM56.9 %GC:55
引物R：size：29 TM67 %GC:55
根据TM=4*（G+C）+2(A+T)-5它的退火温度是多少?
本人小菜鸟一枚,请教高手,主要是不懂从订单上怎么确定G+C及A+T的含量?
我知道有软件可以计算，我只是想搞搞清楚根据上面的公式怎么算？还有从哪里得知G+C及A+T的含量？是订单上给的%GC就是G+C的值吗?还有A+T的含量怎么计算？
答
计算退火温度的方法：
1. 退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 只是粗算,有时不灵,但比较简便.
2.用primer5（or oligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好.
3.合成引物的单子上也有个Tm,减去5～8也可,但有些公司提供的Tm就是方法1计算的.不好意思，我真的是新手，想问一下订单上给的%gc代表什么意思，谢谢订单上给的%GC就是G+C的值不好意思，还有这个是什么意思
TasI(Tsp5091) A (297+30)T (327) 前面是酶的编号后面是A的跑带时的区段吗？为什么是两个值？谢谢是，两个值的原因不清楚