植物组织培养过程中造成污染的原因有哪些?

污染的来源.植物组培污染主要是霉菌、细菌和酵母菌引起的污染.霉菌和酵母菌在培养条件下生长快,很容易观察到,而细菌潜伏期长,植物组织一般不表现症状,所以很难在前期和肉眼观察到[1].国外有关学者认为细菌污染的来源主要有三个：一是材料内部灭菌处理不好,这样造成的污染占污染总数的1/3～1/2.二是在正常的灭菌的条件下,内生菌能够存活,这样的污染占污染源的1/4.三是来自寄生植物的污染占1/4～1/2.同时认为有些植物的昆虫和螨虫的体表带有霉菌的孢子和细菌,在九、十月份是重要的污染源,因多种植物昆虫处在大量繁殖阶段,此时大量昆虫造成的污染源最易造成组培污染的严重发生.近六年来,我们通过对猕猴桃、樱桃、托柄菝葜及大花非洲菊初级培养污染的研究中发现,高温、多雨的环境更有利于污染的发生,而且随着植物材料年龄的增长,植物材料的健康状况不断恶化,组培污染也会更加严重.另外,外植体的状况,环境条件和操作过程也是引起污染的主要原因.
由于培养的植物材料大都采集于田间栽培植株,材料上常附有各种微生物,一旦被带入培养基,即会迅速繁殖滋长,造成污染,培养失败.所以培养前必须对外植体进行严格的消毒处理,消毒的尺度为既能全都杀灭外植体上附带的微生物,但又不伤害材料的生活力.因此,必须正确选择消毒剂和使用的浓度、处理时间及程序.目前,常用的消毒剂有次氯酸钙、氯化汞、次氯酸钠、双氧水、酒精（70％）等.具体消毒方法如下：
（1）茎尖、茎、叶片的消毒消毒前先用清水漂洗干净或用软毛刷将尘埃刷除,茸毛较多的用皂液洗涤,然后再用清水洗去皂液,洗后用吸水纸吸干表面水分,用70％酒精浸数秒钟,取出后及时用10％次氯酸钙饱和上清液浸泡10～20分钟.或用2％～10％次氯酸钠溶液浸泡6～15分钟.消毒后用无菌水冲洗3次,用无菌纱布或无菌纸吸干接种.
（2）根、块茎、鳞茎的消毒这类材料大都生长在土中,常带有泥土,挖取时易遭损伤.消毒前必须先用净水清洗干净,在凹凸不平处以及鳞片缝隙处,均用毛笔或软刷将污物清除干净,用吸水纸吸干后,在70％酒精中浸一下,然后用6％～10％次氯酸钠溶液浸5～15分钟,或用0．1％～0．2％氯化汞消毒5～10分钟,最后用无菌水清洗3～4次,用无菌纱布或无菌纸吸干后接种.
（3）果实、种子的消毒这类材料有的表皮上具有茸毛或蜡质,消毒前先用70％酒精浸泡几秒钟或2～10分钟,然后用饱和漂白粉上清液消毒10～30分钟或2％次氯酸钠溶液浸10～20分钟,消毒后去除果皮,取出内部组织或种子接种.直接用种子或果实消毒,经消毒后的材料均须用无菌水多次冲洗后接种.
（4）花药、花粉的消毒植物的花药外面常被花瓣、花萼包裹着,一般处于无菌状态,只需采用表面消毒即可接种.通常先用70％酒精棉球擦拭花蕾或叶鞘,然后将花蕾剥出,在饱和漂白粉上清液中浸泡10～15分钟,用无菌水冲洗2～3次,吸干后即可接种.