怎么判断实时荧光定量PCR标准曲线是否准确
问题描述:
怎么判断实时荧光定量PCR标准曲线是否准确
答
看标准曲线是否反映出了标准物质的真实浓度那请问标准曲线中的R2代表什么意思?为什么说R2>0.99可信度就高?R2决定系数,英文(coefficient of determination),有的教材上翻译为,判定系数,决定系数的大小决定了相关的密切程度。当R2越接近1时,表示相关的方程式参考价值越高;相反,越接近0时,表示参考价值越低。你做了标准曲线就会归纳出一个方程式来,这个方程式的价值高低由决定系数判定。谢谢你的解答,但我还有一个疑问,是不是说如果算出E接近0.99,同时R2>0.99,这样的定量结果可信度更高呢?首先要解决的问题是你做这个标准曲线用的标本浓度是已知的(比如1*104、1*103、1*102、10copies/ml),然后你做出了横坐标是拷贝数,纵坐标是CT值的一个直线方程,只有这样当你扩增出一个标本的CT值时,带入方程你才能得出这个标本的拷贝数,(这才有意义,可能这些话是多余的,但是很多人做标准曲线时最基本的条件——绘制标准曲线的标本浓度不是个定值,)这时Rsq接近0.99,Eff(扩增效率)也最理想,定量结果可信度高。