western blot 中甲醇作用
问题描述：
western blot 中甲醇作用
答
电转液中SDS增加蛋白的水溶性,促进蛋白在电转液中泳动.若不加SDS,蛋白会沉淀在胶上,但SDS过多会影响蛋白与膜的吸附.甲醇能使SDS与蛋白分离,甲醇浓度越高SDS与蛋白分离越快,但高浓度的甲醇对蛋白会有固定作用,不利于蛋白从胶里跑出来.一般来说甲醇的浓度为20%,但PVDF膜截留marker上交联的小分子颜料的能力很差,可考虑提升甲醇的浓度至25%（它对普通蛋白的转膜影响不太,颜料截留更多）；大蛋白转印可考虑降低甲醇浓度,另外SDS必须添加.甲醇的另一个作用是降温,旧的电转液由于电解质的消耗和甲醇的挥发,电转时电流或电压变化更快、温度升高也更快,因此可考虑增加额外的甲醇；这点对半干转缓冲液的意义较大,因为半干转缓冲液消耗很慢,缓冲液放置的时间较久,甲醇挥发比较严重,可临时少量补加.