请教如何计算出兼并引物的退火温度
问题描述：
请教如何计算出兼并引物的退火温度
我是一个新手,如何根据公司送来的兼并引物的单子上的Tm值推出实际PCR时的退火温度呢?引物单子上有两个Tm值,分别是1M 钠离子,50mM钠离子条件下的Tm值.实际PCR时的退火温度怎么算呢?
答
实际pcr的退火温度一般都是从55℃开始的,有杂带退火温度就提高一点,目的带比较微弱退火温度就降低一点,不用管那个引物单子上的温度,那样太麻烦,有的实验室一天做几百个样品的pcr,如果个个要看引物单子上的温度然后在设计条件,你想想看,那得用多少台pcr仪器啊,所以一般都取默认条件,55℃30s