MRS培养基按配方配制好后,经过高温高压灭菌后,为什么出现不完全凝固现象?
问题描述：
MRS培养基按配方配制好后,经过高温高压灭菌后,为什么出现不完全凝固现象?
配方：蛋白胨10g,牛肉浸膏10g,酵母提取物5g,葡萄糖20g,吐温80 1ml,柠檬酸氢二铵2g,MnSO4·H2O 0.25g,MgSO4·7H2O,K2HPO4 2g,琼脂20g,蒸馏水1000ml.琼脂是后面才加的,1000ml里倒出200ml不加琼脂,另外的800ml按比例加16g的琼脂,再分成两份,两份调pH为6.2,不加琼脂那一份调pH为5.0.经过高温高压灭菌后,加琼脂的那两份出现了不完全凝固,不加琼脂的那份还出现了白色沉淀.请问各位大哥大姐,这究竟是什么原因呢?
灭菌是在121℃高温高压下经过20min处理的。出现这样的问题，会不会是因为灭菌环境呢？培养基是前一天配制的，第二天才调的pH，然后再进行灭菌。
答
一楼说的问题楼主可以考虑一下.
另外,楼主添加琼脂后是否先将培养基煮沸,是琼脂充分溶解后再进行高温灭菌,如果是把琼脂分加入培养基后,直接放入灭菌锅灭菌,理论上灭菌温度足以让琼脂溶化,但是在实际操作过程中,也出现因为琼脂并为全溶,或者分散不好使得培养基不能完全凝固的情况,所以建议下次配制的时候,先将琼脂溶化并用玻璃棒充粉搅拌分散入培养基后,再进行灭菌.
至于白色沉淀的出现是正常的,原因可能有两种,其一就是高温析出,就是MRS培养基物质高温发生变化产生沉淀；另一可能就是如上所说,除琼脂外,其他物质在没有充分搅拌均匀的情况下,不会自动溶解到水中,而一直以沉淀的形式出现.