DNS法测定还原糖.葡糖糖的标准曲线要怎么做?

问题描述:

DNS法测定还原糖.葡糖糖的标准曲线要怎么做?

用EXECL表,用那个里面的曲线横竖坐标按他说的标出来就出来曲线了我想知道的是实验操作10mg/mL标准葡萄糖溶液:
精密称取无水葡萄糖1.0000置80mL蒸馏水中搅拌溶解,待完全溶解后定容至100mL。标记为10mg/mL的标准葡萄糖溶液,同时标记配制日期,4℃条件下保存。
DNS试剂的配制
称取3,5-二硝基水杨酸31.50g缓慢加入5000mL蒸馏水中,不断搅拌,水浴至45℃,逐步加入1000mL氢氧化钠溶液(e),不断搅拌至溶液清澈透明(在加入氢氧化钠溶液过程中,溶液温度不要超过48℃)。再逐步加入四水酒石酸钾钠910.0g、苯酚25.0 g、无水亚硫酸钠25.0 g,继续45℃水浴加热,同时补水3000mL,不断搅拌,至上述物质完全溶解后,冷却至室温,并定容到10000 mL。用滤布过滤,将滤液储存于棕色瓶中,标识名称和配制日期,避光,室温保存7天后可以使用。有效期6个月。

分析步骤:
标准曲线的绘制:
取8支试管按下表加入相关试液后再加入1.5mLDNS试剂,充分摇匀,置沸水浴中反应5min。迅速冷却至室温,用水定容至5.0mL,用0号试管试液作对照,在540nm波长下测其它各试管试液的吸光度。以吸光度为纵坐标,以葡萄糖含量为横坐标绘制标准曲线。


试管号

0

1

2

3

4

5

6

7




缓冲液加入量(μL )

1000

990

985

980

975

970

965

960




葡萄糖标准液加入量(μL )

0

10

15

20

25

30

35

40




葡萄糖含量(μg)

0

100

150

200

250

300

350

400