设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度!
问题描述：
设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度!
文献上62摄氏度,我感觉有点不对劲啊!
给出PCR退火温度的计算的方法！谢谢··
答
一般认为Tm-5度.
但是要看你的Tm计算方法,不同公司合成的引物得出的Tm都不一样,你可以做个梯度PCR看看最适退火温度,以后就有经验了.