增添碱基（基因突变）,此碱基一定与对应的碱基互补吗?

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• 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求!我目的片段大小为2800,载体为eGFP-N1,设计引物中,我是取了ATG开始的前20个左右的碱基,加入酶切位点和保护碱基,后面是取了去掉终止密码子的互补序列,加入酶切位点和保护碱基……（问题：1、除了酶切位点和保护碱基,还有什么需加入什么吗?2、需要在上游序列中加入KOZAK序列吗?其作用是什么?下游也需要吗?3、酶切位点的保护碱基是特定的吗?4、克隆目的基因,必须从ATG开始设计上游引物,终止密码子设计下游引物吗?可不可以从中间或者两侧设计?因为位置若固定的话很难找到合适的引物）……十分紧急,
• 增添碱基（基因突变）,此碱基一定与对应的碱基互补吗?
• 1、DNA的一条单链中,（A+G)/(T+C)=0.4.上述比例在其互补链和整个DNA分子中分别（ ）a.0.4,0.6 b.2.5,1.0 c.0.4,0.4 d.0.6,1.02、在白菜和萝卜的DNA分子中,碱基比值不同的是（ ）A.(A+C)/(T+G) B.C/G C.(A+T)/(G+C) D.A/T3、一下所示四个双链DNA分子的一条链,其中稳定性最差是（ ）A.G-C-T-A-A-A-C-C-.-T-T-A-C-G 双链DNA中A占25%B.G-C-T-A-A-C-C-...-T-T-A-C-G-A 双链DNA中T占30%C.G-C-A-A-C-C-...-T-T-A-C-G-T-A 双链DNA中G占25%D.T-A-A-A-C-C-...G-C-T-T-A-C-G 双链DNA中C占30%4、从提取出DNA进行化学分析,发现鸟嘌呤与胞嘧啶之和占全部碱基数的46%,又知该DNA的一条链（H链）所含的碱基中28%是腺嘌呤,问与H链相对应的另一条链中腺嘌呤占该链全部碱基数的（ ）A.26%
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