用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上
问题描述：
用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上
答
连不上的因素比较多,首先你要先确保载体和基因片段已经用相同的内切酶处理好,然后再看连接体系中你所加的载体的量和基因片段的量是否合理,一般这两者的比例为1:5-1:10之间比较好,还有就是你的连接体系各种成分是否还...就是TAKARA的连接酶，试了好多次了，一直连不上那我觉得还是载体与基因片段的问题，你酶切好后纯化回收酶切产物，将目的基因和载体分别电泳看看，然后根据条带的亮度，大概下相同的体积两者的分子个数的比，然后定好载体与基因片段的比例，如前面所说的，两者的分子摩尔比最好在1:5-1:10之间