什么原因会导致overlap PCR拼不出?
问题描述：
什么原因会导致overlap PCR拼不出?
答
两个片段的大小不能太大.
中间重叠部分不能太短,至少要有20nt以上.30,40比较好.谢谢！是3个片段拼接，长度分别为900bp，1300bp，300bp，3个片段扩的很亮，引物拼接区重叠碱基20多个应该足够了，就是拼接区GC含量较高70%多，全长GC55%。这个估计不行..一方面900和1300片段太大了..20多个重叠对于这么大的片段来说,实在太小了...另一方面,GC含量高,不容易配对啊..你可以尝试多分几段,慢慢连一起,可能会成功..