克隆测序结果找不到目的片段的引物序列

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• PCR产物是单带,切胶回收纯化后,使用ABI3730进行测序,为什么测序没有反应呢?目的片段是120bp.我只是想知道为什么，至于解决方法，呵呵，我已经重新设计引物了。样本太多，一共200多个，建克隆会疯掉的，不过，呵呵
• 关于 克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCRPCR 用T载体PRIMER,然后测序,然后酶切出片段---------》从而达到得到很多此片段的目的.这个做法行么?或者别的做法,推荐下
• 关于454焦磷酸测序的原理问题测序过程到底是如何进行的?我知道每有一个碱基匹配正确就会发出荧光,但我的问题如下：每个磁珠上的单克隆是同个目的基因的不同片段还是不同的目的基因,即该测序方法是能同时测序多个不同基因序列还是快速测出一个基因的序列?如果是将一个基因序列打断到不同的磁珠里,那怎样保证分别测序后各片段序列按照原基因序列顺序重新整合?该方法是否可以控制一次只结合一个碱基（如果目的序列是AAA,在T核苷酸进入时会不会一下合出3个连续碱基）?还有就是假设目的片段长为a,一个碱基进入的时间为t,那么测量整段目的片段的用时是不是就应该是4at?这真的很快吗?以上问题能答多少就答多少,
• 关于通用测序引物的问题现在要克隆一段基因,设计引物时,上游加入HindⅢ酶切位点,下游加入KpnI酶切位点.师兄要求再设计一段通用测序引物,用来检测质粒重组时,目的基因片段是否连在质粒上.那么这个通用测序引物,该怎样设计?是不是针对于HindⅢ和KpnI这两个酶切位点?
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