引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?
问题描述：
引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?
能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6个是酶切位点,后面20个是互补序列,我不确定在酶切位点后面还需不需要要加保护位点?
答
酶切位点后面紧接的引物其实就是保护碱基,所以后面的保护碱基可以去除,去掉这两GCTm肯定会降低的