做pcr,如何确定最佳退火及延伸的时间和温度?
问题描述：
做pcr,如何确定最佳退火及延伸的时间和温度?
答
延伸一般都是72° 时间是根据酶的种类和片段长度决定的
退火温度根据引物来决定 一般先用55° 不行的话再往下降额，书上都这么写。 但是怎么根据情况来决定呢？每次都觉得摸不着头脑。一般的taq酶是一分钟1kb别的酶可以看看说明书是什么速度 然后看你片段多大就可以算出延伸时间了啊 别的没啥摸不着头脑的吧你们现在用的DNA模板，是什么来源？ 还经常组织块提取吗？不同实验室差别很大好不好 我们主要用细胞系的cDNA